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4 Ergebnisse

Superdex 200 MJMtrH + MJMtrA3

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,4 0,9 1,4 1,9 2,4

Elutionvolumen/[mL]

Absorption 280 nm/[mAU]

0,00

0,06

0,12

Absorption 365 nm/[mAU]

280 nm

365 nm

~ 8000 kDa

(0.84 mL)

~ 40 kDa

(1.56 mL)

~ 8 kDa

(1.78 mL)

~ 1 kDa

(2.02 mL)

Abbildung 4.14: Gelfiltrationschromatogramm und Coomassie-gefärbte SDS-Page mit

Proben der Co-Expression in E. coli und gemeinsamen Reinigung von M. jannaschii

des-[225-246]-MtrA und MtrH (MJMtrA3 + MJMtrH). Die höhermolekularen Peaks im

Elutionsprofil der Gelfiltration sind durch Aggregation der Proteine zu erklären. Eine Probe des

40 kDa-Peaks wurde mittels SDS-Page als MJMtrA3 identifiziert. Da dieses Vitamin B

12a

bindet, ist bei 365 nm ebenfalls eine starke Absorption zu beobachten. Der Peak bei ca. 8 kDa

konnte nicht zugeordnet werden. Der 1 kDa-Peak dagegen rührt von nicht gebundenem

Cofaktor her. Auf Bahn 1 der SDS-Page befindet sich die unlösliche Fraktion einer Probe der

Zellsuspension der Anzucht von MJmtrA3/pET22b+ und MJmtrH/pACYC-Duet1 tragenden

E. coli-Zellen fünf Stunden nach Induktion. Sowohl MJMtrH als auch MJmtrA3 wurden

exprimiert. Auf Bahn 2 wurde eine Probe der unlöslichen Fraktion des

Co-Expressionsversuchs von

MJmtrH/pET22b+ und MJmtrA3/pACYC-Duet1 in E. coli fünf

Stunden nach Induktion aufgetragen. Bei dieser Plasmidkombination wurde nur MJMtrH

exprimiert. Auf Bahn 3 ist eine Probe des 40 kDa-Peaks der gezeigten Gelfiltration zu sehen,

die die Identifizierung von MJMtrA3 ermöglichte.

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