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Tabelle 4.2: Übersicht über die verschiedenen Methoden und Pufferbedingungen zur

Abtrennung der Untereinheit MtrH vom gereinigten Gesamtkomplex.

Methode Bedingung

pH-Wert 5,0

7,0

7,4

8,5

9,5

Detergenz 1 % (v/v) Triton X100

40 mM OG

2 % (v/v) LDAO

2 % (w/v) Cholat

Hitzebehandlung/[°C] 42

Salzgehalt/[mM] 100

200

500

1000

2000

ESI-MS-Analyse des Mtr-Komplexes:

Eine ESI-MS-Analyse der zu den verschiedenen Untereinheiten des Mtr-

Komplexes gehörenden Banden im SDS-Gel wurde von Herrn Dr. Julian Langer am

Max-Planck-Institut für Biophysik in Frankfurt durchgeführt. Die entsprechenden

Banden wurden aus einem SDS-Polyacrylamidgel ausgeschnitten (siehe

Abbildung 4.4) und das Masse-Ladungs-Verhältnis der Peptidfragmente nach einem

Trypsin-Verdau bestimmt. Anhand eines Vergleichs dieses Spektrums mit einer

Datenbank wurde die oberste Bande bei ca. 33 kDa als Untereinheit MtrH des Mtr-

Komplexes aus M. marburgensis identifiziert. Bei den Präparationen des Mtr-

Komplexes ohne Untereinheit MtrH (MtrA-G) konnte diese Bande nicht identifiziert

werden. Es ist jedoch aufgrund der Ergebnisse des Western Blots mit

Anti-M. marburgensis MtrH-Antikörpern (siehe folgender Abschnitt) davon

auszugehen, dass es sich bei der besagten Bande auch um MtrH handelt. Die

anderen Untereinheiten des Mtr-Komplexes konnten vermutlich aufgrund ihrer

Hydrophobizität mittels ESI-MS nicht nachgewiesen werden.

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