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4 Ergebnisse

4.2.2 Charakterisierung

Molekulargewichtsbestimmung:

Das Molekulargewicht des isolierten Gesamtkomplexes MtrA-H wurde bestimmt,

um eine Aussage über den oligomeren Zustand treffen zu können. Dazu wurden

verschiedene Methoden verwendet, die zum Teil zu unterschiedlichen Ergebnissen

führten (siehe Tabelle 4.1). Bei sämtlichen präparativen und analytischen

Gelfiltrationen zeigte sich neben einem Hauptpeak bei 670-770 kDa eine Schulter

von 300-400 kDa (siehe Abbildung 4.4). Bei der Analyse der entsprechenden

Fraktionen mittels SDS-Page konnte jedoch kein Unterschied zum Hauptpeak

festgestellt werden. Durch Blaue Native Gelelektrophorese (BN-Page) wurde das

Molekulargewicht auf ca. 300 kDa bestimmt (siehe Abbildung 4.5). Durch eine

analytische Ultrazentrifugation des Gesamtkomplexes MtrA-H, welche von Dr. Vitali

Vogel (Institut für Biophysik, Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt)

durchgeführt wurde, ergab sich ein Molekulargewicht von 620 kDa. Bei der von

Dr. Dilem Hizlan (Max-Planck-Institut für Biophysik, Frankfurt) durchgeführten

elektronenmikroskopischen Einzelpartikelmessung konnte das Molekulargewicht

anhand der Größe des Komplexes auf ca. 600 kDa geschätzt werden.

Das mit Hilfe der Aminosäuresequenzen der Untereinheiten berechnete

Molekulargewicht des Tetramers eines Heterooktamers liegt bei 672 kDa, womit der

Hauptpeak der Gelfiltration sowie die Ergebnisse der Analytischen Ultrazentrifugation

und der elektronenmikroskopischen Einzelpartikelmessung übereinstimmen. Das

berechnete Molekulargewicht des Dimers eines Heterooktamers liegt bei 336 kDa.

Mit diesem Wert decken sich der in der Gelfiltration auftretende Schulterpeak und

das Ergebnis der BN-Page.

Tabelle 4.1: Übersicht über das mit verschiedenen Methoden bestimmte Molekular-

gewicht des Gesamtkomplexes MtrA-H.

Methode Dimer eines

Heterooktamers

Tetramer eines

Heterooktamers

Berechnete Werte 336 kDa 672 kDa

Gelfiltration Schulter bei 300-400 kDa 670-770 kDa

BN-Page 300 kDa

Analytische

Ultrazentrifugation

620 kDa

Elektronenmikroskopische

Einzelpartikelmessung

600 kDa

1 2 ... 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 ... 143 144

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