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4 Ergebnisse

ESI-MS-Analyse:

Die Analyse wurde von der Firma Proteome Factory (Berlin) durchgeführt. Dazu

wurde die zu untersuchende Bande aus einem SDS-Polyacrylamidgel

ausgeschnitten (siehe Abbildung 4.11) und das Masse-Ladungs-Verhältnis der

Peptidfragmente nach einem Trypsin-Verdau bestimmt. Dieses Spektrum wurde mit

einer Datenbank verglichen und so das gereinigte Protein als Untereinheit A des

Mtr-Komplexes aus M. jannaschii identifiziert. Die mit der Datenbank

übereinstimmenden Fragmente sind in Abbildung 4.11 gezeigt. Die detektierten

Fragmente und ihre Scores sind im Anhang (Abschnitt 7.5) aufgeführt.

minosäurese

uenz von M.

annaschi

MtrA:

Abbildung 4.11

: Coomassie-gefärbte SDS-Page und Aminosäuresequenz von

M. jannaschii MtrA. Die Bande bei ca. 24 kDa wurde aus dem Gel ausgeschnitten, einem

Trypsin-Verdau unterzogen und das Masse-Ladungsspektrum der Peptidfragmente mittels

ESI-MS aufgenommen. Beim Vergleich dieser Peptidfragmente mit der Datenbanksequenz

von M. jannaschii MtrA zeigte sich eine Übereinstimmung von 33 %. Die übereinstimmenden

Fragmente der ESI-MS-Anlalyse sind rot gefärbt.

4.4.3 Kristallisation

Für die Kristallisation wurde gereinigtes MJMtrA3 gegen verschiedene

Pufferlösungen dialysiert und anschließend bis zur gewünschten Konzentration

eingeengt. Die Ansätze wurden nach der Sitting drop-Methode in

Kristallisationsplatten mit 96 Vertiefungen mit 90-100 µL Reservoirlösung oder nach

der Hangig drop-Methode in Platten mit 24 Vertiefungen mit 1 mL Reservoirlösung

hergestellt. Es wurde sowohl der Gehalt an Puffersubstanz, Salz, Glycerin,

Reduktionsmittel und Cofaktor Vitamin B

12a

als auch die Proteinkonzentration variiert

(siehe Tabelle 3.8). Letztere bewegte sich im Bereich von 20-92 mg/mL. Sämtliche

im Materialteil (Abschnitt 2.2.10) aufgeführten, kommerziell erhältlichen Screens

1 2 ... 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 ... 143 144

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