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INHALT

Abkürzungen VI

Abbildungen VIII

Gleichungen IX

Tabellen X

1 Einleitung

1.1 Methanogene Archaeen 1

1.2 Der C

-Carrier Tetrahydromethanopterin (H

MPT)

1.3 Die N

-Methyl-H

MPT:Coenzym M-Methyltransferase (Mtr) 4

1.4 Die F

420

-abhängige N

-Methylen-H

MPT-Dehydrogenase (Mtd) 9

1.5 Ziel der Arbeit 13

2 Material

2.1 Computerprogramme 14

2.2 Geräte und Chemikalien

2.2.1 Allgemeine Geräte 15

2.2.2 Molekularbiologischen Arbeiten 15

2.2.3 Bakterienkultivierung 16

2.2.4 Proteinpräparation 16

2.2.5 PAGE 16

2.2.6 Chromatographie 16

2.2.7 Säulen/-materialien 17

2.2.8 Elektroblotten 18

2.2.9 Kristallisation 18

2.2.10 Kristallisationskits 18

2.2.11 Röntgenographischen Methoden 18

2.2.12 Chemikalien 19

2.2.13 Enzyme, Proteine, Vergleichsstandards und Antikörper 20

2.2.14 Kits 21

2.2.15 Verbrauchsmaterialien 21

2.3 Plasmide 21

2.4 Mikroorganismen und Medien 22

2.4.1 Archaeen-Stämme 22

2.4.2 Escherichia coli-Stämme 22

2.4.3 Medien und Agarplatten 23

3 Methoden

3.1 Planung der Vektorkonstrukte 24

3.2 Molekularbiologischen Methoden 26

3.2.1 Extraktion und Reinigung genomischer DNA aus Archaeen-Zellen 26

3.2.2 Herstellung künstlicher DNA-Fragmente mittels PCR 26

3.2.3 Restriktionsspaltung, Dephosphorylierung und Ligation von DNA 28

3.2.4 Herstellung von kompetenten E. coli-Zellen und Transformation 29

3.2.5 Plasmidpräparation 30

3.2.6 Agarosegelelektrophorese 30

3.2.7 Aufreinigung von DNA 30

3.2.8 Bestimmung von DNA-Konzentration und -Reinheit 30

3.2.9 Sequenzierung 31

III

1 2 ... 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 ... 143 144

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